抗AIF单链抗体的构建与高效表达
艾洪武
郭军庆
游上游
1.武汉市儿童医院检验部,武汉,4300162.武汉市儿童医院检验部,武汉,4300163.武汉市儿童医院检验部,武汉,430016
摘要：目的获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体.方法利用重组噬菌体抗体库技术从杂交瘤细胞4c9中分别克隆小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,成功构建AIF4c9 scFv基因,并将其亚克隆于原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),经IPYG诱导表达.表达产物经镍鏊合层析柱复性后,用ELISA和Western blotting检测表达蛋白与AIF的结合特性.结果 AIF4c9 scFv表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在,优化后的柱内复性程序可从高浓度的包涵体变性蛋白中高效复性AIF4c9 scFv表达蛋白,其回收率可达75%左右.AIF4c9 scFv复性蛋白可特异识别AIF抗原,具有良好的AIF抗体活性,其亲和力常数(KDscFv)为7.29×10-8mol/L.表达菌体的功能性AIF4c9 scFv抗体产量约为62 mg/L.结论在大肠杆菌中高效表达的抗AIF Scfv经柱内复性后具有较好的生物学活性.
关键词：酸性同功铁蛋白单链抗体包涵体柱内复性
分类号：R392(医学免疫学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 535-539 )
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