人MBL糖识别域在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定
卢晓
朱平
张丽芸
刘莹
陈政良
1.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105152.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105153.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105154.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105155.南方医科大学免疫学教研室,广州,510515
摘要：目的原核表达重组人甘露聚糖结合凝集素(MBL)糖识别域(CRD).方法采用PCR技术,从含汉族人MBL全长编码区cDNA的重组质粒pGEM-mbl中扩增出CRD包括颈区的基因片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T1中,经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.包涵体经变性、复性后以GSTtrap亲和层析柱纯化,融合蛋白经凝血酶切割后回收目的蛋白.分别以Western blot和ELISA分析表达产物的免疫学和糖结合活性.结果 PCR扩增得到长约450bp的目的基因片段,插入pGEX-4T1载体所获重组表达载体pGEX4T1-CRD的酶切图谱和序列与预期的一致.重组子经诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在.以GSTtrap亲和层析柱纯化获得约Mr43000的GST-CRD融合蛋白,经凝血酶切割后得到约Mr17000的CRD蛋白.纯化的GST-CRD蛋白能与抗人CRD单克隆抗体特异性结合并具糖结合活性.结论获得了具生物学活性的人MBL CRD蛋白,为进一步探索MBL分子CRD的效应功能提供了实验材料.
关键词：甘露聚糖结合凝集素糖识别域融合蛋白糖结合活性
分类号：R392.1(医学免疫学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 521-524 )
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