两种人乳腺珠蛋白基因亚型cDNA的克隆及其原核表达
潘自铁1
李鹏1
刘秀娜1
陈安1
赵力军2
胡川闽1
1.第三军医大学临床生物化学教研室,重庆,4000382.美国疾病预防控制中心,艾滋病、性传播疾病和结核病预防中心,亚特兰大 GA30333
摘要：目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础.方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆bMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法.结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白.结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础.
关键词：乳腺癌人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化
分类号：R737.9(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：重庆市科委项目(2004)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 252-255 )
英文信息