SARS-CoV抗原的纯化与鉴定
张松乐
田光
周华
张良艳
王东勇
阳幼荣
马丽娟
王希良
1.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000712.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000713.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000714.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000715.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000716.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000717.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000718.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
摘要：目的纯化灭活SARS-CoV为研制马抗SARS-CoV免疫球蛋白提供抗原.方法将灭活的SARS-CoV悬液超滤浓缩,用Sepharose 4 Fast Flow分子筛和阴离子交换柱层析纯化,用高效液相色谱、SDS-PAGE和电镜观察测定抗原的纯度.结果将01、02和03三批SARS-CoV悬液分别进行11.2倍、12.5倍和25.0倍超滤浓缩,抗原的回收率依次为48.6%、46.3%和55.6%,凝胶过滤层析后抗原的回收率依次为81.6%、79.3%和86.0%.再经阴离子交换梯度层析进一步提高了抗原的纯度和浓度,蛋白的比活性由纯化前的0.11U/μg增加到1.44U/μg.电镜下观察到SARS-CoV抗原颗粒完整,呈圆形或椭圆形状,直径在80～120 nm之间.SDS-PAGE显示主要条带位于Mr43 000～66000之间,经质谱扫描分析确定该成分为Mr46 000.高效液相层析法分析抗原纯度为97.0%.马抗SARS-CoV免疫球蛋白中和抗体效价在1:6 400～1:12 800之间.结论本研究为制备高效价的马抗SARS-CoV免疫球蛋白奠定了基础.
关键词：SARS-CoV超滤纯化
分类号：R512.99(传染病)
资助基金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2003AA208224)军队重大攻关项目(03F003-3)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 244-247 )
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