成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒的构建、纯化及表达
郭国宁
周跃
张正丰
1.第三军医大学新桥医院骨科,重庆,4000372.第三军医大学新桥医院骨科,重庆,4000373.第三军医大学新桥医院骨科,重庆,400037
摘要：目的构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究.方法以含有全长eDNA的pCMVβ/Cbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,CsCl梯度离心纯化病毒.AdEasy1/Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western-blotting检测Cbfa1蛋白的表达.结果测序、酶切及PCR证实Cbfal基因重组腺病毒载体构建成功.AdEasyl/Cbfal感染NIH3T3细胞后Western-blotting检测到Cbfa1蛋白的表达.结论成功构建了含有小鼠Cb白l基因的重组腺病毒载体,为下一步研究基因治疗骨缺损、脊柱融合奠定基础.
关键词：核心结合因子腺病毒基因治疗
分类号：R681(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 150-154 )
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