鼠疫F1-V融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及鉴定
黄顺军1
王希良2
李名扬3
罗德炎2
阳幼荣2
马丽娟2
1.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071;西南农业大学园艺园林学院,重庆,4007162.军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,1000713.西南农业大学园艺园林学院,重庆,400716
摘要：目的通过构建pET-11c-F1-V融合表达质粒,从而获得具有免疫原性的融合蛋白.方法克隆鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)的V基因和V基因,然后将F1基因和V基因分别连接到pGEM-T载体上,经测序正确后再将F1基因和V基因连接到pET-11c原核表达载体上,构建pET-11c-F1-V融合表达质粒,并转化到BL21(DE3)大肠杆菌中,进行PCR及双酶切鉴定,筛选阳性克隆,通过IPTG诱导F1-V表达,经SDS-PAGE检测表达产物,通过Western-Blot检测重组蛋白的免疫原性.结果测序结果显示F1基因的碱基序列与Gene-bank(X 61996)完全一致,V基因的碱基序列与Gene-bank(M 26405)相比在564 bp处有一同义突变;SDS-PAGE在Mr约58 000处出现一条蛋白条带,经薄层扫描分析目的蛋白条带约占全菌体蛋白的25%左右,主要以可溶性蛋白形式存在;Western-Blot显示重组蛋白具有免疫原性.结论成功地构建了pET-11c-F1-V融合表达质粒,并且在大肠杆菌中获得了高效表达,表达的蛋白具有免疫原性.
关键词：鼠疫耶尔森氏菌F1基因V基因基因克隆基因表达
分类号：R378.6(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 152-155 )
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