FQ-PCR检测小鼠肝癌模型中Cyclin E mRNA方法的建立
刘素娜1
张艳2
张晶敏3
韩立3
江金花2
周玉冰3
王庆端2
1.郑州大学基础医学院 河南郑州4500012.郑州大学医药科学研究院药化室 河南郑州4500523.郑州大学药学院 河南郑州450001
摘要：目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测小鼠肝癌模型中细胞周期蛋白cyclin E mRNA的方法.方法:以cyclinE和β-actin的PCR产物为阳性模板,分别将二者cDNA产物进行10倍梯度稀释,建立双标准曲线,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测cyclin E和β-actin mRNA含量,对熔解曲线进行分析确定扩增产物的特异性.结果:建立的标准曲线线性关系良好,相关系数r均为-1.00,cyclin E和β-actin扩增效率分别为0.91和0.93,熔解曲线分析显示均为单峰,特异扩增产物的Tm值分别为(81.84±0.28)℃和(89.15±0.26)℃.10-4 Cyclin E和β-actin cDNA标本日间变异系数(CV)和批内CV分别为1.02％、1.45％和0.90％、1.48％.结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测cyclin E mRNA是一种方便快捷、经济实惠、灵敏度高、特异性好的方法,为cyclin E的进一步研究奠定方法学基础.
关键词：荧光定量聚合酶链式反应SYBR Green Ⅰ细胞周期素E肝癌
分类号：R-332(实验医学、医学实验)
资助基金：国家自然科学基金(2009ZX09103-110)
论文发表日期：2012-04-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 148-151 )
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