重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定
王广兰
宫璀璀
王文丽
刘亚利
刘琰
邰苏豫
1.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,4500422.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,4500423.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,4500424.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,4500425.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,4500426.解放军第153中心医院济南军区检验中心,河南郑州,450042
摘要：目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCRI,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCRI全长eDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCRI的重组质粒(pPIC9K-sCRI);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCRl的酵母细胞表达出重组人sCRI的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量最高.此蛋白在凝胶上表现为Mr大于31 KDa的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCRl的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCRI融合蛋白.结论:人sCRI融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
关键词：毕赤酵母细胞酵母载体可溶性补体受体1蛋白表达
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：济南军区重点课题(02227)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
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