大肠杆菌不耐热肠毒素基因克隆和无毒突变体mLT63的构建及序列分析
申晓靖
段广才
郗园林
代丽萍
康巧珍
1.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,河南,郑州,4500522.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,河南,郑州,4500523.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,河南,郑州,4500524.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,河南,郑州,4500525.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室,河南,郑州,450052
摘要：目的:大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)是很强的免疫原,也具有很强的粘膜免疫佐剂作用,但LT的毒性限制了它在人类疫苗中使用.本研究希望通过定点诱变构建无毒或减毒并保持LT免疫学特性的突变体.方法:以人源肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株E.coli 44815为研究对象,应用本研究室改进的SDS裂解法小量制备含LT基因的野生大质粒,PCR扩增LT基因,构建重组质粒pNEB193-elt;采用重叠延伸法PCR对LT第63位氨基酸进行体外定点诱变,构建LT突变基因的重组克隆载体,测序并进行序列分析鉴定.结果:采用本研究室改进的SDS裂解法,可成功地小量提取满足扩增模板要求的大质粒;所克隆的LT基因与GenBank公布的一致;定点诱变正确,无非特异性突变.结论:克隆的LT野生基因和定点诱变基因可用于构建重组表达载体,表达重组蛋白,对其粘膜免疫佐剂性或其他相关特性进一步研究.
关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素定点诱变突变体SDS裂解法
分类号：R543.1(心脏、血管（循环系）疾病)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 100-103 )
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