牛SPARC基因可选择性多聚腺苷酸化对前脂肪细胞增殖和分化的影响
周文皓1
张立春2
赵薇1
赵梅曼1
于元元1
周国利1
1.聊城大学 农业与生物学院,山东 聊城 2520002.吉林省农业科学院 动物生物技术研究所,吉林 公主岭 136100
摘要：为探究牛富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因的可选择性多聚腺苷酸化(Alternative polyadenylation,APA)对前脂肪细胞增殖与分化的调控作用,通过cDNA 3'末端快速扩增技术验证牛SPARC基因APA现象的存在;利用双荧光素酶报告基因试验、qPCR、Western blotting等分子生物学技术,分析了SPARC基因3'非翻译区(3'UTR)-APA异构体的差异表达特征,其中报告基因载体分别设置为野生型短 3'UTR 组(WT-3'UTRS)、野生型长 3'UTR 组(WT-3'UTRL)、突变型长 3'UTR 组(Mut-3'UTRL-P1),蛋白质表达载体设置为野生型短3'UTR融合组(WT-SPARCS)、野生型长3'UTR融合组(WT-SPARCL)、突变型长3'UTR融合组(Mut-SPARCL-P1);通过功能获得与缺失试验、CCK-8增殖试验、油红O染色、qRT-PCR技术,设置SPARC过表达组(pCMV-SPARC)、空载体对照组(pCMV)、SPARC干扰组(siSPARC)、阴性对照组(NC),系统探究SPARC基因及其3'UTR-APA异构体对牛前脂肪细胞增殖与成脂分化的影响.结果表明,牛SPARC基因中存在2种3'UTR-APA异构体;与WT-3'UTRS组相比,WT-3'UTRL及Mut-3'UTRL-P1组的荧光素酶活性显著或极显著降低;与WT-SPARCS组相比,WT-SPARCL及Mut-SPARCL-P1组的SPARC基因mRNA及蛋白质表达量均极显著下调.与pCMV组相比,p CMV-SPARC组的增殖标志基因mRNA表达量极显著上调,极显著促进细胞增殖,而成脂标志基因mRNA表达量均极显著下调,脂滴积累量极显著降低;与NC组相比,siSPARC组的增殖标志基因mRNA表达情况则相反;与WT-SPARCL组相比,WT-SPARCS组的增殖标志基因mRNA表达量总体上显著或极显著上调,显著促进细胞增殖,成脂标志基因mRNA表达水平极显著下调,脂滴积累量显著降低.综上,研究揭示了牛SPARC基因的APA调控机制在其前脂肪细胞增殖与分化中的功能差异,不仅为解析其参与牛脂肪沉积转录后调控的分子机制提供了理论参考,也为优质肉质牛的分子育种奠定了理论基础.
关键词：牛SPARC基因可选择性多聚腺苷酸化细胞增殖成脂分化
分类号：S813.1(普通畜牧学)
资助基金：国家自然科学基金(31571274)山东省自然科学基金(ZR2023MC102)科技创新重大项目(2030;2023ZD0404803)聊城大学畜牧学学科开放课题项目(31931210530)
论文发表日期：2026-04-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：11( 121-131 )
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