蜜蜂囊状幼虫病毒荧光定量PCR检测方法的建立
王红坤1
张炫2
宗德琴1
李雨时1
吕明奎1
赵洪木1
1.云南省农业科学院 蚕桑蜜蜂研究所,云南 蒙自 6611012.云南农业大学 动物科学技术学院,云南 昆明 650201
摘要：为建立高灵敏度的蜜蜂囊状幼虫病毒(SBV)检测方法,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测序确定了云南省蒙自市的中华蜜蜂与意大利蜜蜂蜂群中SBV的优势流行株(GenBank登录号:MZ821922.1),针对其保守序列设计引物.提取样品总RNA并经反转录获得cDNA后,采用SYBR GreenⅠ染料法建立反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性及实用性进行验证.结果表明,所设计引物特异性良好;构建的SBV阳性质粒标准品浓度为2.62×10¹⁰copies/µL,在2.62×10³—2.62×10¹⁰copies/µL浓度范围内线性关系良好(R²=0.999 1),扩增效率为102.6%.该方法灵敏度高(检出限为2.62×100 copies/µL)、特异性强(与蜜蜂其他3种常见病毒无交叉反应),且重复性好(组内、组间变异系数均低于1.19%).对云南省蒙自市与贡山县蜂样进行两步法RT-qPCR和RT-PCR检测,发现两步法RT-qPCR的检测灵敏度明显高于RT-PCR:总样本阳性检出率(56.1%vs 11.5%)、贡山县中华蜜蜂(46.2%vs 5.4%)、蒙自市中华蜜蜂(80.0%vs 25.0%)及蒙自市意大利蜜蜂(53.3%vs 13.3%).综上,所建立的SBV两步法荧光定量PCR(SYBR GreenⅠ)检测方法灵敏、可靠,可为我国SBV的快速检测、早期诊断与流行病学监测提供有效技术支持.
关键词：中华蜜蜂意大利蜜蜂囊状幼虫病毒两步法荧光定量PCRSYBR染料法
分类号：S895(养蜂、益虫饲养)
资助基金：国家重点研发计划(2022YFD1601907)国家现代蜂产业技术体系建设专项(CARS-44-kxj13)云南省科技人才与平台计划资助项目(202405AD350070)云南省农业科学院蚕蜂所青年创新基金项目(QC2023012)
论文发表日期：2025-12-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 138-147 )
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