布鲁氏菌BspL蛋白对巨噬细胞炎症因子表达的影响及生物信息学分析
李志强1
祝芳2
王书利3
丁金阔3
歹雅雯3
郑好3
王承与3
李天乐3
1.商丘医学高等专科学校 基础医学教学部,河南 商丘 476005;商丘师范学院 生物与食品学院,河南 商丘 4760002.商丘医学高等专科学校 基础医学教学部,河南 商丘 4760053.商丘师范学院 生物与食品学院,河南 商丘 476000
摘要：为探究布鲁氏菌分泌蛋白L(Brucella secretion protein L,BspL)对巨噬细胞炎症反应的调控作用,基于牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)2308菌株的BspL基因序列(BAB1_1533),构建pET-32a-BspL表达载体,诱导表达并纯化重组BspL蛋白(rBspL).经SDS-PAGE鉴定及浓度测定后,使用rBspL刺激RAW264.7巨噬细胞,通过qRT-PCR检测炎症因子(IL-1β和IL-18)及炎症小体(NLRP3和Caspase-1)的mRNA表达水平,并通过Western blot分析炎症小体(NLRP3和Caspase-1)的蛋白质表达水平;利用在线软件对BspL蛋白进行生物信息学分析.结果表明,成功构建pET-32a-BspL表达载体,pET-32a-BspL表达产物经纯化后在36 ku处出现特异性条带;用rBspL刺激RAW264.7细胞后,与对照组(添加DMEM培养基)相比,试验组(添加50 μg/mL rBspL)NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的mRNA相对表达量极显著提高,且炎症小体NLRP3、Caspase-1的蛋白质表达水平显著提高.生物信息学分析显示,BspL蛋白具有亲水性,存在2个跨膜区,有2个分泌途径信号肽(Sec信号肽),有26个磷酸化位点和5个抗原决定簇;BspL蛋白二级结构以无规卷曲和α-螺旋为主,还存在少量延伸链;三级结构预测结果显示,BspL蛋白中多为无规卷曲,与二级结构预测分析结果一致.综上,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rBspL可诱导宿主细胞释放炎症因子,为进一步研究BspL的功能及分子机制提供了参考.
关键词：布鲁氏菌BspL蛋白炎症因子生物信息学分析
分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)
资助基金：商丘医学高等专科学校开放课题项目(KFKT23016)河南省高等学校重点科研项目(24A230014)河南省重点研发与推广专项(252102111020)大学生创新创业计划项目(202410483044)
论文发表日期：2025-06-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 144-151 )
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