不同启动子介导的vgb基因异源表达对诺沃霉素产量的影响
张一帆1
刘晓艳2
万中义2
方伟2
朱镭2
陈凌2
蔡俊1
周荣华2
王常高1
闵勇2
1.湖北工业大学 生命科学与健康工程学院,湖北 武汉 4300682.湖北省生物农药工程研究中心,湖北 武汉 430064
摘要：为提升新型农用抗生素诺沃霉素的产量,以链霉菌(Streptomyces sp.)HBERC-20821为材料,分别利用5种启动子ermEp、kasOp、kasOp3、kasOp*和SP44-SR12构建工程菌株,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的表达及其在不同启动子介导下的表达量差异,并通过摇瓶平行发酵试验筛选出诺沃霉素产量最高的工程菌株.利用一氧化碳差示光谱法检测所筛选菌株中透明颤菌血红蛋白(VHb)的生物活性,并将所筛选的工程菌株与原始菌株进行发酵罐平行发酵培养,探究vgb基因异源表达对诺沃霉素产量的影响.结果表明,试验成功构建了含有不同启动子的5种工程菌株,在kasOp系列启动子介导下,vgb基因表达量显著高于传统ermEp启动子,提升幅度达9～35倍,其中kasOp3启动子介导的vgb基因表达量最高,为ermEp启动子的35倍.在摇瓶平行发酵培养中,原始菌株HBERC-20821诺沃霉素产量为545.01 mg/L,kasOp启动子介导下的工程菌株20821-kasOp-vgb(20821/PKV)诺沃霉素产量最高,较原始菌株提高46.30%,产量达到797.30 mg/L;一氧化碳差示光谱试验证实工程菌株20821/PKV中VHb蛋白具有生物活性,其与一氧化碳形成的复合物在420 nm波长处展现出特征吸收峰.发酵罐平行发酵培养试验显示,原始菌株诺沃霉素产量为 495.67 mg/L,工程菌株20821/PKV诺沃霉素产量较原始菌株提高62.04%,产量达到803.18 mg/L.综上,在kasOp启动子介导下,工程菌株20821/PKV诺沃霉素产量得到有效提升.
关键词：诺沃霉素链霉菌透明颤菌血红蛋白基因启动子异源表达
分类号：S476.8(各种防治方法)
资助基金：湖北省现代农业产业技术体系项目(2023HBSTX4-07)湖北省重点研发计划项目(2022BBA0043)
论文发表日期：2025-04-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 91-100 )
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