非洲猪瘟病毒D205R蛋白单克隆抗体的制备和抗原表位鉴定
林志钊
赵燕燕
任豪杰
史赛燕
韩世充
何文瑞
万博
张雨杭
张改平
河南农业大学 国家动物免疫学国际联合研究中心,河南 郑州 450002
摘要：非洲猪瘟(ASF)是一种致命的传染病,迄今为止,还没有开发出有效的疫苗或药物用于预防或控制ASF.为提供诊断非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要材料,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组D205R蛋白,制备D205R蛋白的单克隆抗体(mAb),鉴定mAb识别的抗原表位.结果显示,成功构建pET32a-D205R表达质粒,并纯化大小约为44 ku的重组D205R蛋白.蛋白质免疫印迹(Western blot)检测结果表明,重组D205R蛋白与ASFV阳性血清发生特异性反应,有良好的免疫原性.利用杂交瘤细胞融合、筛选的方法,得到mAb 19A5.Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测结果表明,mAb 19A5能特异性识别真核表达的重组D205R蛋白,并能检测到野生型D205R蛋白.用丙氨酸扫描法鉴定出 167-SDPPVVWLGGRPGD-180是mAb 19A5的抗原表位,S167、W173、L174、G175、P178和D180是与mAb 19A5结合的关键氨基酸.保守性和结构分析表明,抗原表位高度保守,且位于蛋白质表面,是线性表位.综上,成功制备mAb 19A5,并鉴定了mAb 19A5识别的抗原表位.
关键词：非洲猪瘟病毒D205R蛋白单克隆抗体抗原表位
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家自然科学基金(32272987)国家自然科学基金(32102655)国家自然科学基金(32373005)河南省重大科技专项(221100110600)国家重点研发计划(2022YFD1801300)河南省科技发展项目(222102110453)
论文发表日期：2025-02-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 124-130 )
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