猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
王瑞宁1
王勋2
李鸽3
李青梅4
李存法5
杨苏珍4
郭军庆4
1.河南牧业经济学院 动物医药学院,河南 郑州 450046;河南省农业科学院 动物疫病防控研究所,河南 郑州 4500022.洛阳职业技术学院 食品与药品学院,河南 洛阳 471023;河南省动物疫病与公共卫生工程研究中心,河南 洛阳 4710233.西北农林科技大学 动物医学院,陕西 杨凌 7121004.河南省农业科学院 动物疫病防控研究所,河南 郑州 4500025.河南牧业经济学院 动物医药学院,河南 郑州 450046
摘要：为了开发检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的免疫诊断试剂,使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠.将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选阳性杂交瘤细胞株,以期获得对PRV反应性良好的抗gE重组蛋白单克隆抗体.结果显示,获得2株(2B5和8F7)稳定分泌抗PRV gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水单克隆抗体的ELISA效价均为1∶1 000 000;单克隆抗体亚型鉴定结果表明,2株单克隆抗体的重链均为IgG1亚型,轻链均为Kappa链.单克隆抗体特异性测定结果显示,2株单克隆抗体仅与PRV反应,不与其他常见病毒发生反应;SDS-PAGE结果显示,纯化后的单克隆抗体均在约50 ku和25 ku处有纯度较高的特异性条带;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的2株单克隆抗体与转染gE质粒的293T细胞发生特异性反应.根据Western blot结果,筛选获得的2株单克隆抗体均在120 ku附近出现特异条带,表明这2株单克隆抗体均能特异性识别PRV.综上,成功制备了2株特异性强、效价高的抗gE蛋白单克隆抗体,为后期PRV诊断试剂盒的制备提供重要的生物材料.
关键词：猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体间接免疫荧光试验
分类号：S816(普通畜牧学)
资助基金：河南省重大科技专项(221100110600-03)河南省科技攻关项目(232102520012)河南省科技攻关项目(242102111031)河南省农业科学院科技创新团队项目(2023TD03)
论文发表日期：2024-12-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 167-173 )
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