基于二聚体核衣壳蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体iELISA检测方法建立
赵啸1
乔松林2
孙亚宁2
钱祁昇2
李睿2
张改平3
1.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵 7121002.河南省农业科学院动物疫病防控研究所/动物免疫学重点实验室,河南郑州 4500023.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵 712100;河南省农业科学院动物疫病防控研究所/动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002
摘要：为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)检测方法.首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列,通过(GGGGS)3 linker将N蛋白基因序列串联,经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体.利用原核表达系统进行诱导表达,并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化.Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性;冻融法比较N-dimer与单体N蛋白(N-monomer)的沉淀析出情况;ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性.以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化,验证其特异性、敏感性、重复性,并应用于临床血清样品检测.结果表明,在16 ℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达.Western-blot结果表明,N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应;相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存,并且免疫反应性更佳.成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性;与商业试剂盒结果进行比较,其阳性符合率为96.88％,总符合率为96.86％,符合率高.综上,成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer,并基于N-dimer建立了 PRRSV抗体iELISA检测方法.
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白二聚体间接ELISA临床检测
分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省重大科技专项(221100110600-03)国家生猪产业技术体系项目(CARS-35)河南省现代农业(生猪)产业技术体系项目(HARS-22-12-S)
论文发表日期：2024-11-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 135-146 )
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