小麦γ-醇溶蛋白1基因克隆及其互作蛋白筛选
王沙沙1
何宁1
黄超1
王刚2
汪庆昌1
晁岳恩1
1.河南省农业科学院小麦研究所/河南省小麦生物学重点实验室,河南郑州 4500022.河南省农业科学院,河南郑州 450002
摘要：为进一步研究γ-醇溶蛋白1基因调控小麦面粉品质的分子机制,以郑麦158(低蛋白质含量、高面团强度)为研究材料,克隆小麦γ-醇溶蛋白1基因,构建诱饵载体pGBKT7-γ-醇溶蛋白1,利用酵母双杂交技术从郑麦158的cDNA文库中筛选γ-醇溶蛋白1的候选互作蛋白,并通过回转验证试验进一步验证其互作关系.结果表明,成功克隆了γ-醇溶蛋白1基因,其cDNA全长为1 020 bp.利用酵母双杂交技术共筛选到117个蓝色单克隆菌落,经菌液PCR检测、测序以及NCBI的BLAST比对分析,共获得10个与γ-醇溶蛋白1互作的候选蛋白,它们分别是富含半胱氨酸和跨膜结构域蛋白1(XM_044546254.1)、α-淀粉酶抑制剂(XM_044509330.1)、特异性内切-1,3:1,4-β-D-葡聚糖酶 2(XM_044550285.1、XM_044594213.1)、蔗糖果糖基转移酶(XM_044554537.1)、支链淀粉酶1(XM_044577151.1)和半胱氨酸蛋白酶B-like(XM_044577994.1),还有与植物生殖生长尤其是果实或者籽粒生长有关的细胞数目调控因子CNR8-like(XM_044483337.1、XM_044491902.1)、CNR2-like(XM_044468782.1)以及参与蛋白质修饰的泛素结构域蛋白 DSK2b-like(Dominant suppressor of KAR 2b like,XM_044546840.1)和 CIP73(CCa MK-interacting protein of 73 ku,XM_044554473.1).候选互作蛋白的回转验证试验结果表明,富含半胱氨酸和跨膜结构域蛋白1、α-淀粉酶抑制剂、特异性内切-1,3:1,4-β-D-葡聚糖酶2和半胱氨酸蛋白酶B-like等4个蛋白质可能与γ-醇溶蛋白1存在互作关系.推测γ-醇溶蛋白1可能与这些蛋白质相互作用参与小麦种子中贮藏蛋白(如半胱氨酸)和淀粉的合成与降解等过程.
关键词：小麦γ-醇溶蛋白1酵母双杂交互作蛋白回转验证
分类号：S512(禾谷类作物)
资助基金：河南省科技攻关项目(232102110220)河南省农业科学院自主创新项目(2024ZC001)
论文发表日期：2024-11-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 27-33 )
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