鸡圆圈病毒3型可视化LAMP检测方法的建立及应用
张民秀
谢芝勋
张艳芳
谢志勤
谢丽基
李孟
罗思思
曾婷婷
王粲
广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)—东盟跨境动物疫病防控重点实验室,广西 南宁 530001
摘要：建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法.参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的扩增温度、引物浓度和反应时间,通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测,验证鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的特异性、敏感性、稳定性和可靠性.结果显示,鸡GyV3 LAMP检测方法的反应体系:总体积为20.0 μL,包括DNA模板1.0 μL,2×Master Mix 10.0 μL,内引物GyV3-FIP和GyV3-BIP混合液(工作浓度16.0 μmol/L)2.0 μL,外引物GyV3-F3和GyV3-B3混合液(工作浓度2.0 μmol/L)2.0 μL,环引物GyV3-LF和GyV3-LB混合液(工作浓度8.0 μmol/L)2.0 μL,ddH2O 3 μL;鸡GyV3 LAMP检测方法的扩增程序:66℃反应20 min,80℃灭活5 min.鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,最低检测浓度为101拷贝/μL,组内和组间变异系数小于5%;与常规PCR方法检测临床样品的结果比较,两者结果符合率达100%.建立的鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,具有特异性好、敏感性高及污染小等优点,且检测结果可通过肉眼观察进行判断,适用于GyV3的临床快速筛查.
关键词：鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化LAMP特异性引物诊断方法敏感性
分类号：S854.44(动物医学（兽医学）)
资助基金：广西科技基地与人才专项(AD17195083)广西八桂学者专项(2019A50)
论文发表日期：2024-04-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 128-136 )
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