H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
屈小天1
王雅楠2
许倩茹3
李雪洋3
张申立3
张二芹3
张改平4
1.河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 4500462.吉林大学 动物医学院,吉林 长春 1300623.河南农业大学 动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心,河南 郑州 4500464.河南农业大学 动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心,河南 郑州 450046;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002
摘要：为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白.首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达.之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织.经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4 660 bp.将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达.重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上.最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好.综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白.
关键词：H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白水稻胚乳表达蛋白质纯化
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08001006-10)
论文发表日期：2024-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 125-132 )
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