鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用
魏蔷1
李青梅1
金前跃1
宋亚鹏2
白怡霖3
张改平4
1.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南 郑州 4500022.河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州 4500023.郑州大学 农学院,河南 郑州 4500014.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002;河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州 450002
摘要：为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶27.之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12800.取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株 9G12和 10E11.iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128000和1∶1020000;IFA效价分别为1∶2000和1∶8000.Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位.病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶27和1∶24.亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型.将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%.综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测.
关键词：减蛋综合征病毒纤维蛋白中和性单克隆抗体抗体中和效价双抗体夹心ELISA
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家自然科学基金(32002284)河南省农业科学院优秀青年科技基金项目(2022YQ22)河南省科技攻关项目(232102110105)
论文发表日期：2024-02-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 128-135 )
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