家蚕Gloverin 2克隆、高效表达及其抗核型多角体病毒感染作用研究
唐芬芬1
杨伟克2
张祖芸1
李娜1
刘娜1
谢昆1
1.红河学院生物科学与农学学院,云南蒙自6611002.云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所,云南蒙自661100
摘要：为获得家蚕抗菌肽葛佬素2(BmGloverin 2),并研究其在家蚕抗核型多角体病毒(BmNPV)感染过程中的作用,以经BmNPV诱导的3龄3日家蚕中肠cDNA为模板,根据GenBank上BmGloverin 2基因序列设计特异性引物,克隆出去除信号肽部分(1-18 aa)的BmGloverin 2基因,与表达载体pET-28a(+)连接构建pET28a(+)-BmGloverin 2,对含有pET28a(+)-BmGloverin 2重组质粒的菌株诱导表达,然后对抗菌肽重组蛋白进行Ni-IDA亲和层析、透析及浓缩过滤以获得高浓度目的蛋白;并采用抑菌试验检测BmGloverin 2重组蛋白生物活性;最后,将具有生物活性的BmGloverin 2重组蛋白和BmNPV混合处理4 h后喂食家蚕,并以直接喂食BmNPV和无菌水处理为对照组,以检测BmGloverin 2对BmNPV感染家蚕的影响.结果显示,成功克隆BmGloverin2基因,并构建重组pET28a(+)-BmGloverin 2;在37 oC、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达可获得大量BmGloverin 2重组蛋白,经SDS-PAGE检测其分子质量为19.1 ku,与预期大小相符,经过纯化浓缩最终获得BmGloverin 2重组蛋白;抑菌试验证明,重组BmGloverin 2蛋白具有生物活性;与BmNPV对照组相比,饲喂重组BmGloverin 2蛋白与BmNPV混合液处理组幼虫存活率提高.可见,BmGloverin 2在家蚕抵抗BmNPV侵染中发挥作用.
关键词：家蚕抗菌肽Gloverin表达核型多角体病毒抗病毒
分类号：S884(蚕桑)
资助基金：云南省地方本科高校基础研究联合专项(2021BA070001-070)云南省农业科学院应用基础研究专项(YJM201710)红河学院博士专项(BS2003)云南省教育厅科学研究基金项目(2022J0888)云南省基础研究计划面上项目(2022FB226)
论文发表日期：2023-08-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 135-141 )
英文信息