稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定
孙雪珂1
丁培阳2
王思桥1
刘思源3
李明慧3
常泽杰3
陈艺兰3
李瑞琪3
张改平4
1.河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州4500022.郑州大学 生命科学学院,河南 郑州 4500013.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州4500024.河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009
摘要：为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系.利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性.将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测.结果显示,稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立,并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白;且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好,具有良好的免疫原性,中和效价为1∶128.综上,成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系,且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性.
关键词：猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞稳定表达蛋白质纯化
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省重大科技专项(221100110600)
论文发表日期：2023-06-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 131-138 )
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