猪圆环病毒3型TB Green Ⅱ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用
李鹏1
孙延举2
王寅彪3
金前跃4
梁晓晓5
银梅2
王选年1
刘兴友1
王利平1
1.新乡学院生命科学与基础医学学院,河南新乡4530032.河南科技学院动物科技学院,河南新乡4530033.新乡医学院公共卫生学院,河南新乡4530034.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州4500025.河南农业大学动物科技学院,河南郑州450002
摘要：为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证.结果显示,建立的TB Green Ⅱ qPCR检测方法特异性良好,在4.74×102～4.74×107拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R2=0.999).建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33％～0.62％,组间变异系数为0.40％～0.73％.对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB Green Ⅱ qPCR方法检出率为9.10％(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55％,6/132).综上,建立的PCV3 TB Green Ⅱ qPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等.
关键词：猪圆环病毒3型TB Green Ⅱ实时荧光定量PCR常规PCR病毒检测
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省科技攻关计划项目(202102110094)新乡市科技攻关计划项目(GG2019018)
论文发表日期：2023-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 135-142 )
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