猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定
王清龙1
王瑞宁2
王勋3
李青梅4
李鸽5
张真真6
杨苏珍4
郭军庆4
张改平7
1.河南牧业经济学院,河南郑州4500112.河南牧业经济学院,河南郑州450011;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州4500023.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学动物医学院,河南郑州4500024.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州4500025.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌7121006.河南农业大学动物医学院,河南郑州4500027.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学动物医学院,河南郑州450002;扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009
摘要：为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白;以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白,利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性,通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响.Dotblot结果显示,gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达,其表达量在转染96 h达到峰值.SDS-PAGE和Western blot结果显示,从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90％,经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低.间接ELISA结果显示,gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶ 12 800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL,其抗原活性是原核表达的4倍.对临床血清的检测结果显示,基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5％.综上,在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白,在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力.
关键词：猪伪狂犬病病毒gE蛋白分泌表达糖基化修饰抗原活性
分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省重大科技专项(221100110600)河南省农业科学院科技创新团队项目(2022TD02)
论文发表日期：2023-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 127-134 )
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