禽腺病毒血清4型SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立与应用
卢清侠1
金前跃1
冯丽丽2
柴永笑3
郭振华1
邢广旭1
张改平1
1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院中英禽病国际研究中心,河南郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州2250092.河南省农业科学院农业经济与信息研究所,河南郑州4500023.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院中英禽病国际研究中心,河南郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100
摘要：为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保守区域,设计荧光定量检测引物,建立FAdV4 SYBR Green I荧光定量PCR检测方法.该方法扩增产物长度为95 bp,最低检测下限为7.1×102拷贝/μL,且与其他禽源病毒无交叉反应,批内和批间重复性试验变异系数均不超过2％,具有良好的特异性和重复性.将建立的检测方法应用于检测FAdV4在鸡肝癌细胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)上的增殖特性,并与TCID50法测定的病毒滴度进行比较,结果显示,2种检测方法具有良好的相关性.综上,本研究建立的检测方法可用于FAdV4的临床早期快速检测.
关键词：禽腺病毒血清4型Hexon基因荧光定量PCR检测
分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省农业科学院自主创新项目(2022ZC67)中原英才计划(育才系列)中原青年拔尖人才项目(ZYYCYU202012148)河南省自然科学基金优秀青年科学基金项目(222300420051)
论文发表日期：2022-12-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 131-138 )
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