嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的原核表达、纯化与免疫原性研究
简思杰1
晁嘉1
孙薇2
陈锐3
丁锐3
陈琛4
刘祥1
1.陕西理工大学 生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西 汉中 723001;阜阳师范大学 生物与食品工程学院,安徽 阜阳 2360372.陕西理工大学 生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西 汉中 723001;陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,陕西 汉中 7230013.陕西理工大学 生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西 汉中 723001;陕西理工大学 秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育),陕西 汉中 7230014.陕西理工大学 生物科学与工程学院/中德天然产物研究所,陕西 汉中 723001;陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,陕西 汉中 723001;陕西省资源生物重点实验室,陕西 汉中723001
摘要：为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件;采用包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化方法获得AHA1182蛋白并免疫红鲫;利用Western blot检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价;采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用,评价非特异性免疫;利用组织病理学切片探究AHA1182蛋白免疫对红鲫内脏的影响.结果显示,AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性,尤其在气单胞菌间亲缘关系较近,由此推测,AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用;成功克隆、表达、纯化AHA1182,最佳诱导条件:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L,在28℃条件下诱导8 h;红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性,AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1:3200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示,AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫.从组织病理学切片可以看出,AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响.综上,嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性.
关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182原核表达免疫原性红鲫血浆组织病理学切片主动免疫
分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)Q71(生物大分子的结构和功能)
资助基金：陕西省科技厅面上项目(2022JM-120)国家外国专家局项目(GDT20186100426)
论文发表日期：2022-11-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 135-144 )
英文信息