蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法的建立
王红坤
王艺桦
周丹银
董坤
张炫
云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201
摘要：为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性和可行性进行验证.结果显示,建立的两步法荧光定量PCR检测方法采用的引物特异性良好,在6.58×101～6.58×108拷贝/μL质粒标准品间具有良好线性关系,R2为0.999 7,扩增效率为100.8％.该方法的灵敏度为6.58拷贝/μL,与蜜蜂黑蜂王台病毒和以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,组内变异系数为0.20％～0.66％,组间变异系数为0.08％～0.98％,对蜜蜂样品残翅病毒的阳性检出率明显高于普通PCR,具有良好的特异性、重复性和实用性.综上,成功建立了一种灵敏度高、适用性好的残翅病毒两步法实时荧光定量PCR检测方法,为我国蜜蜂残翅病的流行病学调查、疫情监测和预警机制的构建提供新的技术支持.
关键词：西方蜜蜂东方蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCRSYBR染料法灵敏度
分类号：S895.9(养蜂、益虫饲养)
资助基金：国家自然科学基金(31560667)国家现代蜂产业技术体系建设专项(CARS-44-kxj13)
论文发表日期：2022-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 154-161 )
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