鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的原核表达及抗原性分析
荣娜
简思杰
孙薇
康超
陈琛
刘祥
陕西理工大学 生物科学与工程学院 中德天然产物研究所,陕西 汉中 723001
摘要：探究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的免疫原性与抗原性,评价其免疫学功能,以期为嗜水气单胞菌亚单位疫苗的开发提供理论依据.采用生物信息学方法预测TolC蛋白的理化性质,分析其菌属间同源性与进化关系,构建TolC蛋白表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化TolC蛋白,免疫小鼠制备TolC抗血清,Western blot检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟TolC蛋白抗血清对不同鱼类致病菌的体外识别,探究TolC蛋白的抗原性.结果表明,TolC蛋白为孔道蛋白,在气单胞菌属间进化保守.成功表达、纯化了TolC蛋白,其最佳表达条件:菌液OD600为1.0、IPTG浓度0.1 mmol/L、37℃ 诱导8 h.Western blot结果表明,制备获得特异性TolC抗血清,效价达到1:3200;ELISA结果显示,TolC抗血清与嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、溶藻弧菌均存在识别作用.综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC具有较好的免疫原性和抗原性,并可能对不同鱼类致病菌存在交叉免疫保护作用.
关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC原核表达诱导条件多克隆抗血清抗原性
分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)Q71(生物大分子的结构和功能)
资助基金：国家外专局项目(GDT20186100426)陕西省科技厅重点研发计划项目(2020LSFP2-38)陕西理工大学人才项目(SLGQD1803)
论文发表日期：2021-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 157-164 )
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