新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定
李旭锋1
王垚1
金前跃2
周稳3
柴永笑3
陈晓3
丁培阳4
张改平5
1.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 4500022.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州2250093.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 7121004.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 4500025.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009
摘要：为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度.结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃ 条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5％甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90％的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰.综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰.
关键词：新城疫病毒HN蛋白毕赤酵母蛋白质纯化蛋白质活性
分类号：S855(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家重点研发计划(2016YFD0500800)河南省科技攻关计划(192102110185)
论文发表日期：2020-03-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 145-150 )
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