猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测
魏蔷1
白怡霖2
柴书军1
刘运超1
宋亚鹏1
张改平3
1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州4500022.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵7121003.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009
摘要：为制备用于ELISA检测猪瘟病毒的Erns蛋白,根据昆虫细胞密码子偏好性对Erns的基因序列进行优化,将优化后的Erns基因插入带有信号肽的表达载体pFastBacl-gp67中;随后将重组质粒pFastBacl-gp67-Erns转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,挑选白斑,提取重组黏粒Bacmid -Erns;将重组黏粒转染sf21细胞得到杆状病毒,经扩增后得到P3病毒,利用其大量感染细胞,3d后收取细胞培养上清;通过镍填料纯化得到分泌表达的Erns蛋白,通过SDS-PAGE及Western blot 检测分泌蛋白的表达水平、纯化情况,用PNGase F处理分析其糖基化水平,通过ELISA分析其抗原性.结果 显示,成功构建了重组质粒pFastBacl-gp67-Erns,蓝白斑筛选获得了重组黏粒Bacmid-Erns,在此基础上获得了重组杆状病毒,利用其感染sf21细胞,成功分泌表达了Erns蛋白,纯化所得Erns蛋白纯度较高,具有较高糖基化修饰水平,且纯化所得Erns蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清,其抗原性良好.
关键词：猪瘟病毒Erns蛋白分泌表达糖基化分析活性杆状病毒
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家重点研发计划(2017YFD0501103)
论文发表日期：2020-02-15
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 136-141 )
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