菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析
张娴
李超林
郑乔木
严子成
廖海
周嘉裕
1.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,6100312.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,6100313.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,6100314.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,6100315.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,6100316.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031
摘要：胰凝乳蛋白酶是昆虫的主要消化酶,可能参与多种消化以外的生理过程.为了解该蛋白质基因表达特性,基于菜青虫(Pieris rapae)转录组数据,克隆了1个菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1并进行相关分析.该基因编码区全长861 bp,编码286个氨基酸,含有典型的丝氨酸蛋白酶催化三联体(H57 、D102 、S195),经丝氨酸蛋白酶底物特异性口袋分析,显示其属于胰凝乳蛋白酶.PrCT1与黑脉金斑蝶胰凝乳蛋白酶(GenBank登录号:OWR53227)同源性最高,达到49％,且亲缘关系最近.构建pET28a-PrCT1原核表达重组载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株进行原核诱导表达.结果 发现,重组PrCT1蛋白以包涵体形式存在,分子质量为33.26 ku.利用实时荧光定量PCR检测菜青虫不同组织中PrCT1 mRNA表达及饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后PrCT1 mRNA的表达情况显示,PrCT1基因主要在菜青虫的中肠中表达,且在饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后表达水平均下调,推测PrCT1可能是菜青虫中肠中发挥食物消化作用的重要蛋白酶,且可能是重要的抗虫靶点.
关键词：菜青虫胰凝乳蛋白酶克隆原核表达蛋白酶抑制剂饥饿
分类号：S433.4(病虫害及其防治)
资助基金：国家自然科学基金(31500276)四川省重点研发项目(2018SZ0061)四川省应用基础研究计划(2017JY0222)成都市科技技术研发项目(2016-HM01-00260-SF)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 74-81 )
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