黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达
张元臣
蔡新
张国强
董丽丽
王景顺
1.安阳工学院,河南 安阳,4550002.安阳工学院,河南 安阳,4550003.安阳工学院,河南 安阳,4550004.安阳工学院,河南 安阳,4550005.安阳工学院,河南 安阳,455000
摘要：为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制,以黏虫为试验材料,利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因Mswly的全长序列,同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达.克隆、测序后分析表明,Mswly基因的cDNA全长为652 bp(GenBank登录号为MG692501),开放阅读框序列长度为426 bp,编码141个氨基酸.其编码蛋白质分子质量为16.26 ku,理论等电点为6.57;含有信号肽,剪切位点在第20个和21个氨基酸之间;含有溶菌酶活性所需要的谷氨酸和天冬氨酸活性位点.系统进化树分析表明,Mswly与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起,说明Mswly为C型溶菌酶.Western blotting结果显示,Mswly重组蛋白大小约17 ku,与预期分子质量大小一致,说明Mswly基因在昆虫Sf9细胞系能够高效表达.综上,从黏虫脂肪体中克隆得到了1个C型溶菌酶基因Mswly的完整cDNA序列,并将其在草地贪夜蛾细胞系Sf9中进行了高效表达.
关键词：黏虫溶菌酶基因克隆RACE系统发育真核表达
分类号：S433.4(病虫害及其防治)
资助基金：安阳工学院博士科研启动基金(BSJ2016011)河南省自然科学基金重点项目(182300410003)
论文发表日期：2019-05-02
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 70-77 )
英文信息