利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎
尉翔栋1
吕晨晨1
朱肖亭2
冯亚杰2
辛晓玲2
施巧婷2
梁瑞清3
徐照学1
王二耀2
滑留帅2
1.河南省农业科学院 畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室,河南 郑州450002;河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州4500022.河南省农业科学院 畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室,河南 郑州,4500023.郑州外国语学校,河南 郑州,450001
摘要：为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎.从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7 EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证.结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28％;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00％;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40％;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失.综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎.
关键词：牛MSTN基因基因编辑CRISPR-Cas9胚胎
分类号：S823(家畜)Q789(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-38)河南省肉牛产业技术体系项目(S2013-08)河南省农业科学院畜牧兽医研究所博士启动费项目(2016BSQD)河南省农业科学院自主创新专项(2018ZC57)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 131-136 )
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