非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备
李杰1
张星星2
郭晶1
孟庆玲1
乔军1
张国武1
王晓婷1
李妍1
才学鹏3
1.石河子大学 动物科技学院,新疆 石河子,8320032.新疆农垦科学院 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆 石河子,8320003.中国农业科学院 兰州兽医研究所,甘肃 兰州,730046
摘要：为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因.将构建的融合基因片段克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体pET-p30-54,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体.SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47.1 ku;Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性.将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体.
关键词：非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白大肠杆菌表达系统多克隆抗体反应原性
分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家重点研发计划(2017YFD0502300)兵团中青年科技创新领军人才计划项目(2016BC001)
论文发表日期：2018-09-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 126-130 )
英文信息