重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞及 重组蛋白表达策略的优化
李文丽1
刘霞1
刘在新2
卢曾军2
范朋举2
1.甘肃农业大学 生命科学技术学院,甘肃 兰州,7300702.中国农业科学院 兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃 兰州,730046
摘要：为确定嵌合口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白在昆虫细胞(Sf-9)中的最佳表达条件.通过对比悬浮培养和贴壁培养2种培养条件,探究Sf-9细胞的最佳培养方式;利用血球计数板每隔24 h进行细胞计数,绘制Sf-9细胞生长曲线;将P1代重组病毒传代至P3代,提取重组病毒基因组DNA,进行PCR鉴定,检测插入目的基因的完整性;通过研究感染复数(MOI)和感染时间的关系来摸索重组病毒最佳感染条件,以获得高滴度的重组病毒;利用Western blot检测目的蛋白的表达量并探究重组蛋白的最佳表达条件.结果表明,悬浮培养的Sf-9细胞大小均一、边缘整齐,生长状态良好;PCR鉴定结果表明,插入的FMDV中和表位基因完整,可以进行重组蛋白的表达;Western blot结果显示,重组蛋白同时与FMDV阳性血清和PPV阳性血清产生特异性反应,进一步证明了插入的FMDV中和表位的存在;重组蛋白最佳表达条件是以10个MOI病毒液感染悬浮Sf-9细胞,在72 h时重组蛋白表达量最大.
关键词：口蹄疫病毒猪细小病毒中和表位杆状病毒载体表达系统昆虫细胞
分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家自然科学基金(31172336)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 118-122 )
英文信息