AAV-SaCas9敲除MSTN基因病毒的构建及鉴定
汪新建
樊爽爽
翁少亭
杨国宇
褚贝贝
王江
1.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,4500022.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,4500023.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,4500024.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,4500025.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,4500026.河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州,450002
摘要：为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAV-SaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV.-293细胞3d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×1012vg/mL.
关键词：肌肉生长抑制素基因CRISPR-Cas9腺相关病毒载体293T细胞
分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省科技计划(142300413209)国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX0801015B)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 118-121 )
英文信息