旱稻Tail-PCR技术主要影响因素的优化和验证
朱昀
李朝炜
刘嗣凡
刘颖
魏景芳
1.河北科技大学,河北石家庄,0500182.河北科技大学,河北石家庄,0500183.河北科技大学,河北石家庄,0500184.河北科技大学,河北石家庄,0500185.河北科技大学,河北石家庄,050018
摘要：以转基因旱稻为材料,对Tail-PCR方法进行了分析优化,包括DNA样品质量、扩增产物稀释程度、酶的种类、简并引物组合方式、引物结合偏好性等.结果表明,DNA样品质量的高低是影响试验成功的重要因素,样品纯度不高导致扩增无法正常进行;扩增后对产物稀释不充分会影响下轮扩增效果,适当增大产物稀释倍数可在下轮扩增中增大出带可能;LA Taq酶与普通Taq酶相比扩增效果没有明显不同,使用普通Taq酶即可进行Tail-PCR扩增;混合简并引物在旱稻中并没有获得更好的扩增效果.此外,发现简并引物对于不同物种存在偏好性,常规4种简并引物与旱稻基因组均可高效结合.优化后的Tail-PCR技术结果稳定,重复性好,可以准确地获得转基因旱稻插入位点的旁侧序列.
关键词：旱稻Tail-PCR技术优化影响因素
分类号：S511.6(禾谷类作物)
资助基金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08001003-006)河北科技大学五大平台开放基金(SW21)河北科技大学五大平台开放基金(2015PT51)河北省高等学校科学技术研究项目(QN2017071)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 7-11 )
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