小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测
曹玲珑
李冬兵
熊大斌
邓利
牛洪斌
姜玉梅
尹钧
1.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500022.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500023.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500024.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500025.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500026.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州4500027.河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南郑州450002
摘要：为构建小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用.利用RT-PCR扩增Ta Trx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用.结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用.因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trx-h蛋白相互作用的蛋白.
关键词：小麦硫氧还蛋白酵母双杂诱饵载体自激活
分类号：S512.1(禾谷类作物)
资助基金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2011ZX08002-003)“十二五”国家科技计划农村领域项目(2012AA101105)
论文发表日期：2014-07-02
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 19-22 )
英文信息