拟除虫菊酯类农药降解酯酶EstA融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化
刘娜1
徐汉卿2
崔健3
茆灿泉3
许雷2
1.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;中国农业科学院研究生院,北京1000812.中国农业科学院研究生院,北京,1000813.西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031
摘要：以前期克隆得到的拟除虫菊酯类农药降解基因estA(GenBank:DQ906143)为出发基因,构建表达系统,获得可溶性融合蛋白,并通过优化诱导表达条件,获得具有实际应用价值的相关应用参数.结果表明,成功构建了重组表达载体pMal-c2X-estA并转化至宿主菌BL21 (DE3),获得酯酶estA基因诱导表达系统；通过SDS-PAGE凝胶电泳、以α-乙酸萘酯为底物的酶活性检测及Western blot方法,确认外源蛋白EstA在大肠杆菌宿主菌中成功表达并具有酯酶活性.重组基因工程菌可溶性原核表达诱导条件的优化试验表明,其最佳诱导表达条件是:Ca2+浓度1.0 mmol/L、诱导初始OD600值0.7、诱导剂IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导初始pH值7、诱导温度26℃、诱导时间17.5h,优化后的酯酶活性(92.03U/mg)较优化前(44.64 U/mg)提高了1倍多.
关键词：拟除虫菊酯类农药生物降解酯酶estA基因可溶性蛋白原核表达条件优化
分类号：S482.3+5(农药防治（化学防治）)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2011AA10A205)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 72-79 )
英文信息