利用烟草的cDNA酵母表达文库筛选镉胁迫相关基因
李静1
王晶1
张美2
1.中国科学院华南植物园/中国科学院植物资源保护与可持续利用重点实验室,广东广州510650;中国科学院大学,北京1000492.中国科学院华南植物园/中国科学院植物资源保护与可持续利用重点实验室,广东广州,510650
摘要：为了鉴定烟草在重金属镉胁迫处理下的功能基因,构建烟草cDNA酵母表达文库,并利用镉敏感的突变株对文库进行初步筛选.首先将烟草幼苗进行重金属胁迫处理,然后取幼根提取总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成双链cDNA,将cDNA与入门载体pDONR222的同源重组区连接,再转到酵母表达载体pDEST22上,构建了Gateway技术兼容的酵母cDNA表达文库.经检测,构建的cDNA酵母表达文库滴度为4.32×106 cfu/mL,库容量为0.86×107 cfu,平均插入片段长度大于1 kb,文库质量较高.通过镉敏感酵母突变株△ycf1筛选烟草重金属镉胁迫相关基因,获得酵母单克隆70个.经分析可知,其涉及到谷胱甘肽转移酶、铜分子伴侣及甲硫蛋白等24个不同蛋白基因,初步鉴定为烟草应答重金属镉胁迫的候选基因.
关键词：烟草重金属镉胁迫cDNA文库功能基因
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：中国科学院重点实验室开放基金(201220zs)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 46-49 )
英文信息