土壤微生物总DNA的V3可变区PCR反应体系优化
殷全玉1
郭夏丽2
赵铭钦3
王岩2
1.郑州大学化工与能源学院,河南郑州450001;河南农业大学烟草学院,河南郑州4500022.郑州大学化工与能源学院,河南郑州,4500013.河南农业大学烟草学院,河南郑州,450002
摘要：为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化.主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为:10.5 ng模板DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5 μL,2.5 UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50 μL; PCR循环程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸70 s,29个循环；72℃延伸5 min.试验结果表明:选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键.
关键词：土壤微生物DNA16S rDNAV3区PCR扩增优化热启动方式退火温度
分类号：S154.3(土壤学)
资助基金：吉林省烟草工业有限责任公司科技攻关计划重大项目(JY2006012)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 65-68 )
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