一种嵌合式DNA聚合酶的表达及功能验证
王尧1
王玉玲1
张闻慧2
吴银荣2
赵梦然1
罗忠宜1
林森3
1.安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳4550002.澳大利亚外科诊断有限公司,澳大利亚悉尼20693.安阳康圣环球医学检验所有限公司,河南 安阳455000
摘要：为了建立一套基于大肠杆菌表达系统的嵌合式高保真DNA聚合酶的重组表达与纯化的工艺,首先将含有目的基因的质粒转化至大肠杆菌BL21中,通过高压破碎仪进行细胞破碎,再用离子交换层析方法获得嵌合型高保真聚合酶.优化反应条件显示在28℃自动诱导下表达的嵌合DNA聚合酶蛋白产量较高.利用高压破碎仪将细胞破碎获得可溶蛋白,然后利用硫酸铵沉淀将蛋白粗纯,并采用离子交换层析柱纯化,最终获得较纯的DNA聚合酶.通过对获得的嵌合DNA聚合酶进行活性分析,证实该聚合酶具有高效的活性,为以后大规模生产高保真DNA聚合酶奠定基础.
关键词：脱氧核糖核酸嵌合脱氧核糖核酸聚合酶聚合酶链反应蛋白纯化
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：河南省科技计划(222102310210)安阳市科技发展计划(2021A01SF002)安阳工学院博士后启动基金(BSJ2020017)安阳工学院博士后启动基金(BSJ2021030)
论文发表日期：2023-07-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 120-124 )
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